Уфа
16 февраля 2016г.
Актуальность: Одним из наиболее клинически значимых производных гемоглобина является метгемоглобин (MetHb или Hi)-продукт окисления Fe2+ в составе гема до Fe3+, при этом железо теряет способность связывать и транспортировать кислород. Существует большое количество методов определения метгемоглобина в крови, среди которых наибольшее распространение получил фотометрический метод Evelyn- Malloy (считается референтным). В настоящее время, в связи с распространением анализаторов газов крови с входящими в их состав блоками ко-оксиметрии, а также портативными ко-оксиметрами, встает вопрос о сопоставимости между собой результатов, полученных при измерении различными приборами. По причине отсутствия коммерческих аттестованных контрольных материалов с высокими уровнями метгемоглобина (основная причина- нестабильность MetHb в крови и гемолизатах), возникает необходимость в создании
«кустарных» контрольных материалов, позволяющих провести сравнительные измерения на современных газовых анализаторах/ко-оксиметрах и классическим методом Evelyn-Malloy. Одним из основных метгемоглобинобразователей, использующихся для моделирования метгемоглобинемии, является нитрит натрия (NaNO2), причем его добавление к цельной крови применяется, как правило, в сочетании с последующим отмыванием эритроцитов для предупреждения воздействия «не прореагировавшего» нитрита натрия. Также метгемоглобин может быть получен при воздействии феррицианида калия (K3[Fe(CN)6]) на свободный эндоэритроцитарный гемоглобин.
Цель: оценить стабильность нитритного (без отмывания) и феррицианидного метгемоглобина в экспериментальных образцах крови.
Материалы и методы: 40 мл свежеполученной от здорового добровольца венозной крови были перенесены в равном количестве в 13 вакуумных гепариновых пробирок (по 3 мл крови). В дальнейшем в семь пробирок вносился 4% раствор NaNo2 в количестве от 5 до 35 мкл, а в оставшиеся шесть пробирок, после предварительного лизирования эритроцитов дезоксихолатом натрия, добавлялся 10% раствор 10% K3[Fe(CN)6] в количестве от 5 до 50 мкл. Впоследствии был проведен ряд измерений уровня метгемоглобина в полученных образцах крови: через 40, 70, 10, 135,200 и 480 минут.
Результаты и обсуждение: результаты измерений отражены в Табл.1 и 2. Выявленная стабильность феррицианидного MetHb, вероятно, обусловлена нарушением работы систем восстановления MetHb вследствие разрушения эритроцитов. Рост уровня нитритного MetHb (по сравнению с первоначальным), вызван, скорее всего, постепенным проникновением нитрита натрия внутрь эритроцитов, тогда как его последующее снижение может быть как следствием восстановления окисленного гемоглобина, так и переходом метгемоглобина в нитрозогемоглобин.
Таблица 1
Стабильность феррицианидного метгемоглобина
10% K3[Fe(CN)6] /
|
40 мин
|
70 мин
|
105 мин
|
135 мин
|
200 мин
|
480 мин
|
Экспозиция
|
MetHb
|
MetHb
|
MetHb
|
MetHb
|
MetHb
|
MetHb
|
5 мкл
|
5,3
|
5,2
|
5,5
|
5,5
|
5,4
|
5,4
|
10 мкл
|
9,9
|
9,7
|
10,1
|
10,3
|
10,2
|
10,3
|
20 мкл
|
19,4
|
19,3
|
19,6
|
19,8
|
19,6
|
19,9
|
25 мкл
|
24,5
|
24,4
|
24,9
|
24,8
|
24,3
|
24,5
|
30 мкл
|
28,1
|
29,5
|
29,6
|
29,7
|
29,7
|
29,5
|
50 мкл
|
49,7
|
49,5
|
50
|
49,6
|
49,6
|
49,4
|
Таблица №2
Изменение уровня метгемоглобина во времени при нитритном моделировании (без отмывания эритроцитов)
4% NaNO2 / Экспозиция
|
40 мин
|
70 мин
|
105 мин
|
135 мин
|
200 мин
|
480 мин
|
|
MetHb
|
MetHb
|
MetHb
|
MetHb
|
MetHb
|
MetHb
|
5 мкл
|
17,3
|
17,8
|
16,8
|
15,1
|
11,6
|
2,9
|
10 мкл
|
26,6
|
28,6
|
28,2
|
26,8
|
22,9
|
7,9
|
15 мкл
|
37,4
|
40,8
|
41,2
|
40,4
|
37,1
|
18,8
|
20 мкл
|
40,6
|
44,6
|
45,4
|
45,2
|
42,3
|
23,2
|
25 мкл
|
52,8
|
58,2
|
60,3
|
61,7
|
61,7
|
42,8
|
30 мкл
|
57,5
|
61,6
|
63,9
|
65,8
|
70,1
|
56,4
|
35 мкл
|
59,7
|
63,2
|
66,3
|
68,4
|
75,7
|
70,4
|
Выводы: феррицианидное моделирование метгемоглобинемии позволяет получить стабильные по уровню MetHb образцы крови, но требует обязательного предварительного лизирования эритроцитов, в то же время нитритное моделирование без отмывания эритроцитов не дает стабильного уровня MetHb, но, возможно, может быть использовано для оценки состояния восстановительных систем.
|